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对于我们仪器使用人员而言,我们经常会遇到:
仪器开关机了,性能有变化么?
仪器借给其它人/其它项目使用了,性能有发生变化么?或者进了很多针样本,仪器性能有下降么?
希望将方法转移到不同类型/厂家的仪器,那么新的仪器能满足检测要求么?或者,我们需要采购仪器,那应该如何比较不同类型/厂家的仪器性能差异?
针对上述问题。我们来具体分析下。
一般而言,仪器开关机了,我们需要使用PPG或者调谐液对峰宽和质量轴进行检查。这种操作当然没有什么问题,但严格来说,PPG或者调谐液考察的是:在调谐模式下,更具体来说,是在特定的离子源参数,特定的进样方式(如针泵)下,对特定的物质(调谐液组分)进行考察,并不能真实有效地反应仪器的变化。例如,在调谐模式下,我们一般都不开离子源温度,如果离子源加热模块出现问题,PPG并不一定能给出相应的提示。
仪器借给其它人或其它项目使用,以及进了很多样本,PPG更是无法有效地对仪器性能进行有效的评估。
对于不同型号/不同厂家的仪器比较,首先,我们不应该盲目的相信厂家宣称的,某个浓度的化合物,信噪比(S/N)能达到多少多少。原因包括:
首先,厂家在测试的时候,不管是水还是有机溶剂,其纯度都是非常高的,因此可能把噪音压得很低。但现实情况是,我们很多实验室出于成本的考虑,根本不会购买这么高纯度的试剂。
其次,整个系统的选择对于化合物的影响是很大的。比如流动相是否加酸,流速大小,色谱柱类型,离子源参数都会对信噪比产生影响。
化合物的响应是和离子对的选择有关的。例如,化合物的脱水峰响应通常是很高的,但现实情况是,脱水峰在实际样本中,基线会很高,一般是我们需要避免选择的。
基于上述以上几点,参考美国药典(USP)色谱通则描述:
“系统适应性测试是气相和液相色谱法中不可或缺的一部分,用来验证色谱系统的分离度和重现性能否完成当前的分析。测试基于的原则是,整个系统是由仪器、电路,分析方法和样品所组成的,我们将其作为一个整体去测试,从而验证整个系统。”
系统适应性测试的总体目标是监视色谱结果,确保色谱适应性。
因此,笔者在这里建议:仪器使用人员应该准备SST样本,即用于测试系统适应性的样本。简单来说,就是我们配置包括一系列化合物的溶液(即SST样本),并用SST样本建立一个分析方法,在特定的仪器条件下进行分析,并记录下来检测结果;之后,再将该SST溶液,分析方法以及仪器条件,在相同的或者不同的仪器上再次进行重现,以此来考察仪器的性能。
具体来说:
SST样本配置,由于SST样本为包括一系列化合物的溶液,而对于这些化合物的选择,笔者的建议是,a.) 化合物为实验室经常分析的物质,这样能更加符合我们的实际需求;b.) 化合物本身应该是稳定的,否则结果就不具有说服性。c.) 化合物的数量不妨多些,最好能涵盖不同分子量范围,既有正离子也有负离子更好。d.) 对于浓度的选择:不能太低,否则响应过低,波动太大没有说服力;浓度太高,仪器有波动也不明显。因此建议浓度是中间浓度水平。e.) 对于配置液,除了考虑化合物的溶解性和稳定性,也需要避免使用纯有机溶剂,否则可能会出现溶剂效应。
分析方法建立,这个主要涉及仪器参数,对于质谱的离子源参数,尽量使用实验室常用的参数或仪器默认参数。对于可以同时正负切换的仪器,我们就建立一个有正有负的方法。对于不可同时正负的,我们就建立正离子模式和负离子模式的两个方法。液相参数需要重点注意:梯度不可变化过于剧烈,否则即便液相有波动也看不出来。因此笔者的建议是,尽量使用从低有机相比例到高有机相比例的方法,同时梯度变化尽可能缓慢,使得液相系统出现波动时,我们能从保留时间中明显观察到。
完成SST样本配置和分析方法建立后,我们就可以利用连续进SST样本,并对仪器性能进行评估。
观察保留时间波动:考察泵的稳定性以及是否有漏液现象。
观察响应波动:考察质谱系统的稳定性。
减少进样量:考察进样器的稳定性,例如当进样量为20
L,响应为40,000,当进样量改成5 L时,响应应不低于10,000。回到最开始的3个问题:
评估开关机后性能变化:我们可以在关机之前连续进3针SST样本,在开机后,再次进3针SST样本,即可看出仪器性能是否发生了变化。
不管是仪器借给其它人,或者是做了其它项目以及进了很多针,我们都可以在最开始测试SST样本,最后再测试一遍,观察响应以及保留时间的变化。
至于转移方法,那更简单,可以直接用我们的方法测试SST,再到新的仪器上进行测试。需要注意的一点是,我们应该手动计算S/N,不同的仪器,不同的算法给出来的结果千差万别。
总结,相比于PPG或者利血平,使用SST样本对结果的评估更加全面,更加现实,也更加符合实验室实际需求。因此笔者的看法是,对于仪器使用人员,有SST样本的检测方法真的很有必要。