CTC富集技术
人体循环系统中CTC的含量极低,肿瘤转移患者每毫升全血中仅有1~10个CTC,因此要实现CTC的检测对其进行分选富集是一个关键的步骤。CTC分选富集效果的优劣将会直接影响其后续的检测效果,因此高纯度、高灵敏性(不丢失CTC)、快速、细胞活性高的CTC分选富集技术是CTC临床应用的重点。
微流控芯片技术是基于CTC 的物理特性或生化特性或两种特性结合起的富集技术,该技术所需样品量小、流速可控及构建透明而且能够捕获活细胞等特点,已被广泛应用于CTC分选富集中。微流控芯片技术目前已经历了三代的发展过程: 第一代芯片为以CTC-Chip为代表,第二代芯片以HB-Chip 为代表,第三代芯片以CTC-iChip 为代表。
微流微柱富集:该类芯片基于CTC 与血细胞生化特性的差异,在芯片中设置微柱阵列将其从血液中分离出来。此类芯片以CTC-Chip 为代表,该芯片是第一个使用流体技术富集CTC的装置。CTC-Chip 由78.000 微柱阵列组成,微柱被识别EpCAM 的抗体包被,微柱的几何排列和流体流速被优化以促进细胞附着到抗体包被的柱上。目前用于CTC 检测和表征的技术严重依赖于免疫细胞化学和需要高分辨率成像的其他技术,这在非透明三维微柱阵列的存在下是困难的。
微流表面富集:由于基于微柱结构的芯片的局限性,表面捕获的微流体芯片被开发,这些芯片使用抗体包被的表面装置捕获CTC表面捕获装置的简化架构更适合于大规模生产,并且还允许制造更易于成像的透明装置。此类芯片以HB-Chip 为代表,其微流道的结构为鱼骨形(HB),表面被识别EPCAM 的抗体包被,血液流过一个可视通道,通道内鱼骨形沟回能够引起血液的轻微敦旋,从而增强了其与抗体修饰表面的接触。与第一代CTC 芯片相比,第二代的HB 芯片制作更为简单,且可更高效地捕获肿瘤细胞,捕获效率约90%,后来人们在第二代的基础上加上了aptamer(结合CTC 表面的EpCAM),进一步提高了CTC 的捕获效率。捕获的CTC被固定在装置的表面上,并且难以恢复并进一步分析。
微流免疫磁珠富集:目前国内已经有多家公司或研究单位应用免疫磁珠技术来解决表面捕获装置的局限性,该技术能很好地控制细胞捕获与释放。天烁第三代流星TM系列第三代循环肿瘤细胞分选仪是天烁生物历经多年研发而成的。其分选技术基于先进的设计理念和国际领先的生产工艺水平,为广大科研和临床用户提供高效、简便、低成本的一站式血液稀有细胞检测解决方案。它平台独家采用微流控和免疫磁珠相结合技术,在肿瘤细胞的捕获效率和纯度上比市场同类产品提升近100倍,大大提升了癌症检测断的准确率。其优势为:细胞分选效率高、产物纯度好、自动化程度高、稳定性好、通量高。其细胞捕获效率和纯度比市场同类产品提升近百倍,为推动CTC检测大规模临床应用奠定了良好的基础。
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