做项目只能从头摸索调研大量文献数据
包出来的病毒滴度很低,稳定性很差
不知道怎么才能提高感染效率
为了诸如此类的问题而日夜发愁
这,是不是屏幕前的你的科研现状?
那么,不如把病毒包装这项难度偏高的工作交给拥有多年相关经验的赛业生物吧。
AAV病毒包装常见问题解答(节选)
实现AAV在动物体内表达需要注意哪些关键点?
➢ 血清型的选择
AAV的血清型主要由AAV衣壳蛋白的结构所决定,不同的衣壳蛋白结构识别不同的细胞表面受体,因此血清型的选择会影响AAV的感染效率、组织亲和性和开始表达的时间。
➢ 启动子的选择
需要看是选择广谱性启动子还是特异性启动子。相比于血清型的组织特异性,特异性启动子可实现细胞的特异性,因此对特异性要求较高的研究,可以选择某种细胞特异性表达的启动子。
➢ 注射方式
例如,对于可以进行局部注射的组织器官,采用局部多点注射靶器官可取得较好的特异性和表达效果。
➢ 病毒量及滴度
根据不同的靶器官组织和所使用的不同AAV血清型(扩散能力不同),推荐注射的AAV量不同,传递到组织中的病毒颗粒数量对于感染效果影响很大。但AAV使用量并不是越多越好,过多的量可能出现病毒溢出,且根据我们的经验,病毒量太多有时候甚至会导致表达降低的情况。
➢ 检测时间
不同基因的表达高峰时间是不同的,再加上AAV需要从单链DNA变成双链DNA,一般在2周可检测到基因表达,如无抗体产生的影响,基因的表达可持续表达半年以上的时间。
如何通过AAV实现体内的特异性表达
其实,不止是病毒量及滴度会影响到其在小鼠体内的表达,我们还需要综合考虑多个方面的因素。实现体内特异性调控有以下常见的4种策略:
策略 | 优势 | 局限 |
原位注射 | 病毒用量小 | 可适用的组织有限 操作门槛较高 |
特异性血清型 | 病毒感染效率高 | 特异性血清型的AAV种类少 细胞特异性较差 |
特异性启动子 | 种类多 细胞特异性强 | 不同启动子表达效率差异较大 启动子较大占用载体容量 |
Cre-loxp | 细胞特异性好 调控效率高 可实现KO | 商业性Cre鼠品系有限 繁育周期长 |
AAV 感染后过表达效果弱?
AAV 的表达效果能维持多久?
AAV 注射能缩短其表达时间吗?
……
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